原位雜交是指將帶有標(biāo)記的已知順序核酸為探針與細(xì)胞或組織切片中核酸進(jìn)行雜交，最后通過(guò)顯色或熒光檢測(cè)對(duì)特定核酸順序進(jìn)行精確定量定位的過(guò)程。
其中原位雜交（熒光）可進(jìn)行單標(biāo)、雙標(biāo)和三標(biāo)檢測(cè)，即實(shí)驗(yàn)時(shí)分別采用一種、兩種和三種不同熒光素標(biāo)記的探針同時(shí)檢測(cè)一個(gè)樣本。
| 貨號(hào) | 項(xiàng)目 | 規(guī)格 | 價(jià)格 |
| TP203-01 | 軟化脫鈣（快脫） | 張 | 詢(xún)價(jià) |
| TP203-02 | 原位雜交（組織芯片DAB顯色） | 張 | 詢(xún)價(jià) |
| TP203-03 | 原位雜交（熒光單標(biāo)） | 張 | 詢(xún)價(jià) |
| TP203-04 | 原位雜交（組織芯片熒光單標(biāo)） | 張 | 詢(xún)價(jià) |
| TP203-05 | 原位雜交（熒光雙標(biāo)） | 張 | 詢(xún)價(jià) |
| TP203-06 | 原位雜交（組織芯片熒光雙標(biāo)） | 張 | 詢(xún)價(jià) |
| TP203-07 | 原位雜交（熒光三標(biāo)） | 張 | 詢(xún)價(jià) |
| TP203-08 | 原位雜交（組織芯片熒光三標(biāo)） | 張 | 詢(xún)價(jià) |
1、原位雜交（DAB顯色）：
（1）石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-無(wú)水乙醇Ⅰ5min-無(wú)水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-DEPC水洗。
（2）消化：根據(jù)組織固定時(shí)間長(zhǎng)短，切片于修復(fù)液中煮沸10-15分鐘，自然冷卻。后基因筆畫(huà)圈，根據(jù)不同組織不同指標(biāo)特性，滴加蛋白酶K(20ug/ml) 37°消化20-30 min。純水沖洗后PBS洗3次×5min。
（3）阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶：滴加3%甲醇-H2O2，室溫避光孵育15min，將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。
（4）預(yù)雜交：滴加預(yù)雜交液，37°C孵育1h。
（5）雜交：傾去預(yù)雜交液，滴加含探針雜交液, 恒溫箱 37度雜交過(guò)夜。
（6）雜交后洗滌：洗去雜交液，2×SSC，37°C 洗10min，1×SSC，37°C洗2×5min，0.5×SSC室溫洗10min。若非特異雜交體較多，可以增加甲酰胺洗滌。
（7）封閉：滴加封閉血清 BSA。室溫30min。
（8）滴加鼠抗地高辛標(biāo)記過(guò)氧化物酶(anti-DIG-HRP)：傾去封閉液，滴加anti-DIG-HRP。37°C孵育40min，后PBS洗4次×5min。
（9）DAB顯色：切片稍甩干后，在圈內(nèi)滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下控制顯色時(shí)間，陽(yáng)性為棕黃色，純水沖洗切片終止顯色。
（10）復(fù)染細(xì)胞核：Harris蘇木素復(fù)染3min左右，自來(lái)水洗，1%鹽酸酒精分化數(shù)秒，自來(lái)水洗，氨水返藍(lán)，流水沖洗。
（11）脫水封片：將切片依次放入75%酒精6min-85%酒精6min—100%酒精I(xiàn) 6min—100%酒精I(xiàn)I 6min-正丁醇6min—二甲苯透明，將切片從二甲苯中拿出稍晾干后，中性樹(shù)膠封片。
2、原位雜交（熒光）：
（1）脫蠟至水：依次將切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-無(wú)水乙醇Ⅰ5min-無(wú)水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-DEPC水洗。
（2）消化：根據(jù)組織固定時(shí)間長(zhǎng)短，切片于修復(fù)液中煮沸10-15分鐘，自然冷卻。后基因筆畫(huà)圈，根據(jù)不同組織不同指標(biāo)特性，滴加蛋白酶K(20ug/ml) 37°消化20-30min。純水沖洗后PBS洗3次×5min。
（3）預(yù)雜交：滴加預(yù)雜交液，37°C孵育1h。
（4）雜交：傾去預(yù)雜交液，滴加含探針雜交液, 恒溫箱37度雜交過(guò)夜。
（5）雜交后洗滌：洗去雜交液，2×SSC，37°C 洗10min，1×SSC，37°C洗2×5min，0.5×SSC室溫洗10min。若非特異雜交體較多，可以增加甲酰胺洗滌。
（6）DAPI復(fù)染核：切片滴加DAPI染液，避光孵育8min，沖洗后滴加抗熒光淬滅封片劑封片。
1、石蠟切片常溫運(yùn)輸；冰凍切片-20°運(yùn)輸。
2、細(xì)胞爬片加原位雜交固定液固定15min后，密封，4°運(yùn)輸。
1、全面且深入的系統(tǒng)化病理研究服務(wù)
沃登病理實(shí)驗(yàn)中心具有10余年的服務(wù)經(jīng)驗(yàn)，已形成從病理實(shí)驗(yàn)、病理成像到病理分析的完整研究體系。一流的硬件平臺(tái)，經(jīng)驗(yàn)豐富的技術(shù)團(tuán)隊(duì)，穩(wěn)健踏實(shí)的做事風(fēng)格，讓我們成為眾多科研人員病理實(shí)驗(yàn)合作伙伴的首選品牌。
2、以標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)作為服務(wù)宗旨
沃登以一流的設(shè)備和技術(shù)人員作為可靠基礎(chǔ)，不斷的進(jìn)行方法的開(kāi)發(fā)優(yōu)化，確保實(shí)驗(yàn)過(guò)程的可重復(fù)性，實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性與一致性。
3、量身定做的技術(shù)支持
沃登秉承著“用可靠成就科研”的理念，在科研實(shí)驗(yàn)領(lǐng)域已深耕多年，服務(wù)了眾多院校機(jī)構(gòu)，擁有豐富的經(jīng)驗(yàn)和完善的管理體系。憑借一流的技術(shù)人才，為客戶(hù)的科研需求提供專(zhuān)業(yè)的建議，量身打造科研實(shí)驗(yàn)方案。
